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大分子DNA(一般长度超过20kb,在某些情况下,超过40kb)在电场作用下通过孔径小于分子大小的凝胶时,将会改变无规卷曲的构象,沿电场方向伸直,与电场平行从而才能通过凝胶。此时,大分子通过凝胶的方式相同,迁移率无差别(也称“极限迁移率”),不能分离。脉冲场凝胶电泳技术解决了这一难题,它应用于分离纯化大小在10~2000kb 之间的DNA 片段。 这种电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的,DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间显著地依赖于分子大小,DNA 越大,这种构象改变需要的时间越长,重新定向的时间也越长,于是在每个脉冲时间内可用于新方向泳动的时间越少,因而在凝胶中移动越慢。反之,较小的DNA 移动较快,于是不同大小的分子被成功分离。在许多实用的PFGE 方法中,倒转电场凝胶电泳是最简单最常用的方法(FIGE)。通过把一个在不同电场方向有不同脉冲方式的脉冲电场加在样品上,倒转电场凝胶电泳(FIGE)设备能把大小范围在10~2000kb 的DNA 片段分开。FIGE也可通过重新确定一个对准完全固定好角度的电场,这样会进一步扩展其分离极限达到10Mb。

脉冲场凝胶电泳仪

(1)相同(indistinguishable):酶切图谱间有同样的条带数,且相应条带大小相同,流行病学上则认为相同,这种经PFGE证实的结果,用其它方法检测不可能显示实质性的差异。

(2)紧密相关(closelyrelated):PFGE试验中,其它克隆株与暴发克隆株有一致的单一基因事件的改变,如点突变、插入或DNA缺失。典型的情况下,这种变化可导致2~3条带的差异,当一些分离菌株被多次重复培养或自同一病人多次分离时可观察到这种现象。

(3)可能相关(possiblyrelated):两个独立的基因情况所致的一致的差异,如出现了4~6条带差异,此时能用简单的插入或DNA缺失或限制性位点的获得或缺失来解释。这些菌株与暴发株间遗传基因不紧密相关,流行病学上也不大可能相关,在长于6个月时间及大范围的暴发中收集的菌株可出现这类情况。

(4)不相关(unrelated):1个分离菌株通过3个更多个独立的基因事件所致的一致的改变,其PFGE图谱与暴发克隆株样式不同,则可认为与暴发克隆株不相关(一般总有7个或更多个条带的差异)。典型情况下,这一分离株常只有少于50%的良好的分离的片段出现在暴发株图谱样式中。

双歧杆菌和肠杆菌的比值大于1,肠道微生态健康

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« This particular version was published on 19-Aug-2013 11:01 by 吕龙贤.