电泳法

　　主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。

非电泳法

　　有化学抑制法、热失活试验、亲和沉淀法和免疫分析法等。化学抑制法、热失活试验灵敏度和特异性较差。目前只用作鉴别某些病理血清碱性磷酸酶组织来源的过筛试验。亲和沉淀法和亲和电泳法一样利用麦胚植物血凝素的作用将骨型碱性磷酸酶和其他组织来源的碱性磷酸酶分开，然后测定骨型碱性磷酸酶的活性。该方法操作简便，有较好的灵敏度和特异性，但是当血清标本含有胆汁型碱性磷酸酶时，由于该酶也能和麦胚植物血凝素结合而使骨型碱性磷酸酶假性增高。近年建立的免疫分析法能把灵敏度、特异性、可靠及操作简便等特性很好地结合起来，从而满足了临床的常规应用。由Garnro等报道的放射免疫测定法测定的是骨型ALP的免疫活性蛋白而不是酶活力，并具有可以接受的特异性。而最近由Gomez等应用对骨型碱性磷酸酶特异很强的单克隆抗体建立的免疫分析法具有高度的敏感性和特异性，而且操作简便重复性好，被认为是目前鉴别和定量骨型ALP的最佳方法。