1.灵敏度和特异性
　　血清与重氮试剂混合后，在规定时间所测定的胆红素，相当于直接胆红素含量，总胆红素减去直接胆红素的值即为间接胆红素。该方法在反应时间不同，结果相差很大。时间短，非结合胆红素参与反应少，结合胆红素反应也不完全；时间长，结合胆红素反应较完全，但一部分非结合胆红素也参与反应。这是一个很复杂的问题。化学钒酸法也可检测血清总胆红素和结合胆红素。胆红素氧化酶法测定样本和试剂用量少，特异性高，重复性好，能有效地抑制BOD对UBil和δBil的氧化,特异性的检测CBil,并可用于自动生化分析仪，但目前还不能准确测定结合胆红素。
2.干扰因素
　　2.1标本应尽快分离，避免溶血，否则将影响测定结果。
　　2.2胆红素对光敏感，标准及标本均应尽量避光。
　　2.3脂血及脂溶色素对测定有干扰，应尽量取空腹血。