1.绵羊红细胞（sheep red blood cell，SRBC）自绵羊红细胞颈静脉无菌采血，注入放有玻璃珠的无菌干燥三角烧瓶中，轻轻旋摇15min，除去纤维蛋白。也可将羊血与等量或2倍量的阿氏（Alsever）液混合，既可抗凝，又适于储存。分装，4摄氏度保存，可用2-3周。实验前，取适量SRBC用生理盐水洗涤2次，第3次用缓冲液洗涤，离心弃去上清液，取比积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液，加入20-30倍的稀释液中。在541nm波长处比浊，以吸光度为标准调整红细胞浓度。
　　2.溶血素 溶血素（hemolysis）即抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC作为抗原免疫家兔所得的兔抗血清，无需进不步提纯，但试验前应先行加热56摄氏度30min或60摄氏度3min以灭活补体。
　　3.稀释缓冲液 磷酸缓冲液或巴比妥缓冲液等均可用于溶血试验，ph调到7.2-7.4之间。另加适量NaCl以保持等渗，加适量活化补体必不可少的钙离子和镁离子。还可加入0.1%明胶以稳定蛋白溶液，加入0.02NaN3防腐，以利保存。
　　4.50%溶血标准管 作CH50试验时，应同时配制50%溶血标准管。配制方法：取2%绵羊红细胞悬液0.5ml，加2.0ml蒸馏水，将SRBC全部溶解，再加入1.8%NaCl溶液2.0ml较正为等渗溶液，最后加入2%SRBC悬液0.5ml，即为50%溶血悬液，混匀后取此液2.5ml，随试验一起温育。
　　5.取新鲜血清标本，在各管中加入血清与试剂，一并置37摄氏度水浴箱中温育30min。温育后各管2500r/min离心5min，仔细观察比较，选择溶血程度与标准管最为相近的两管，在分光光度计上分别读取OD541值，以最接近标准管OD值的一管定为最高有效反应管。按下列公式求50%溶血的总补体值。
　　CH50（U/ml）=（1/血清用量）*稀释倍数
　　CH50试验测定经典途径总补体溶血活性，所反应的是补体9种成份的综合水平。方法简单、快速，但敏感性较低，补体的溶血活性除与试验中反应体积成反比外，还与反应所用缓冲液的PH值、离子强度、钙镁浓度、绵羊红细胞数量和反应温度有一定关系。缓冲液PH和离子强度增高，补体活性下降，钙、镁离子虽可稳定溶血系统，但过量则反应抑制溶血反应，故实验时反应的各个环节应严加控制，统一步骤。