1. 灵敏度和特异性
　　效价测定技术只能得到一个大概的抗体浓度数值，因为从原理上看这个方法是不可靠的。它仅仅估计了结合到红细胞上的抗体数量而非血清中的抗体数。在滴定的终点处，凝集指示由相对少数的高亲和力抗体造成。因此这些分子在血清中占的比例与效价有较强的相关性。如果血清中含有两种等量的抗体，其中一种的平衡常数是另一种的10倍，于是有较高结合平衡常数的抗体效价将比另一个高出10倍。
2. 干扰因素
　　血清稀释操作，这是一种不精确的技术，除非使用了特殊预防措施，否则稀释工具(如滴管)上残留的少量血清很容易沾染上一个又一个稀释管。研究表明，手工技术与同位素技术测定的结果相差很大。