采用Ficoll密度梯度离心法分离人骨髓中的单核细胞。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,平均分子量为400,000,当密度为1.2g/ml,未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重,离心后漂浮于分层液的液面上,也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞,就可从外周血中分离到单个核细胞。单核细胞贴壁培养形成克隆后经传代提纯得到骨髓干细胞。

低温离心机;培养箱;
得到的细胞经流式检测CD29和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性。

得到骨髓干细胞以用于诱导分化为肝脏、脂肪、成骨等细胞,或移植进行干细胞治疗
正常人新鲜骨髓
395元/次: DMEM(50ml,40元/250ml);试剂间充质干细胞盒(100ul,1976/2ml),富集胎牛血清(5ml,3000元/500ml);培养瓶2个(10元/个);FICOLL(10ml,1600元/500ml),15ml离心管(3个,5元/个)

辛娇娇俞炯
人工肝平台

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