用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 TIM3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 TIM抗体、 HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 TIM3 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），计算样品浓度。