中文名称:人免疫缺陷病毒抗体(Anti-HIV)试验
  英文名称:human immunodefiency virus antibody,anti-HIV
  相关试验:p24抗体检测、CD4和CD8、艾滋病病毒载量、艾滋病病毒耐药性基因型检测
项目介绍 :
  人类获得性免疫缺陷综合征又称艾滋病(acquired immune deficiency syndrome, AIDS),是一种由人类免疫缺陷病毒(human immunodefiency virus,HIV)感染引起的慢性传染性疾病。病毒感染后导致机体免疫功能部分或完全丧失,CD4+T淋巴细胞数目减少,继而出现机会感染、肿瘤等多种多样的临床表现。
  人体感染HIV后,即开始了病毒试图在体内生存,机体免疫反应试图清除病毒的两种力量的持续较量。在没有任何有效治疗的情况下,数年或十数年后病毒将战胜机体,病人死亡。HIV抗体产生于血清学转换期,从HIV感染到产生抗体(或血清抗体阳转)称为“窗口期”,>95%的HIV抗体都发生在感染后的5~8个月,故一般认为窗口期为6个月。目前作为诊断手段使用的检测主要包括抗HIV病毒抗体检测、病毒培养、核酸检测和抗原检测。其中对病毒抗体的检测是最常规使用的方法,这不但是由于这类检测特异性、敏感性较高,方法相对简便、成熟,更重要的原因是HIV抗体在病毒感染后除早期短暂的窗口期外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到。在一些特殊情况下,当抗体检测无法满足HIV感染诊断的需要时,病毒分离及测定、核酸检测、抗原检测可作为辅助手段使用。
有何用途:
  艾滋病病毒抗体检测用来筛查和诊断艾滋病病毒感染。艾滋病病毒感染的早期治疗和免疫系统监测可以大大提高患者长期健康。另外,了解艾滋病病毒状况可能有助于改变对自己或他人有风险的行为方式。
  艾滋病病毒抗体检测往往通过为酶联免疫吸附试验筛查试验完成。如果结果为阳性,需要重复酶联免疫吸附试验。酶联免疫吸附试验方法非常敏感,但需要另一个试验,免疫印迹来确认检测结果,因为酶联免疫吸附试验可能会出现假阳性。
何时检测:
  一些组织,包括疾病控制中心、美国医师学会以及艾滋病医学学会建议任何人超过13岁都应接受艾滋病病毒筛选。如果您是高危险人群或如果您认为您可能已接触过艾滋病病毒,艾滋病病毒抗体检测尤为重要。
  HIV抗体在病毒感染后除早期短暂的窗口期外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到。HIV抗体的检测主要用于HIV病毒感染的诊断及采供血机构进行血液筛查和各医疗卫生机构常规筛查。HIV抗体筛查呈阳性反应的标本由于存在假阳性的可能,必须做确认试验。
  酶联免疫法:阴性。
 
  HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现,可延续至终生,血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验(westernblot,WB)。
(1) HIV抗体初筛检查
  检测HIV抗体是常规使用的HIV病原学诊断方法。为了使检测结果达到尽可能高的准确性,HIV检测使用特殊的策略,即先用敏感性高的方法进行初筛,初筛阳性的标本再用特异性强的方法进行确认。HIV抗体初筛检测的方法很多,如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay,PA)、乳胶凝集实验(1atex agglutination assay,LA)、各种快速检测实验(rapid tests)、放射免疫实验(radio immunoassay,RIA)等。目前使用最多的方法是ELISA法。
1)ELISA
  基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物,酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观察结果。初筛用的HIV ELISA试剂目前已经发展到第四代检测试剂。第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高。第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应板,由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。第四代试剂则在第三代的基础上进一步增加了P24抗原的检测,把HIV抗原和抗P24的抗体同时包被反应板,可同时检测血清中的HIV抗体和P24抗原。
2)快速法试剂
  A.人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法):人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外,肉眼观察,定性的免疫分析,检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体,用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用,本品检测阳性者,需进行进一步确证。
  B.Instant CHEKTM-HIV l+2金标快速诊断试剂:Instant CHEKTM-HIV 1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法, 用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。
  C.斑点印迹试验(或免疫层析/或渗滤):斑点印迹试验一般采用硝酸纤维素膜作固相载体,用HIV抗原包被于固相载体,加入待测标本(可为血清、血浆、尿液和其它体液),一定温度反应后洗去未结合于固相载体上的标本,包被抗原和被检血清中抗体结合,用胶体金(或胶体硒)代替底物连接在葡萄球菌蛋白A上,金标记蛋白A具有与人Ig结合的能力,因而可与被捕获的HIV抗体结合。若样品中有HIV抗体,则薄膜上就会产生一桔红色斑点(或线条),一般3~10 min出结果,特异性较好, 较为适宜于偏远地区临床用血检测,但不适于城市地区的献血员筛查。
  D.明胶颗粒凝集试验:明胶颗粒凝集试验(PA)的基本过程是先将样品稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保温(一般为室温)。当血清中有HIV抗体存在时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA操作简便,无需特殊仪器设备,适合对少量标本的检测。
(2)HIV-1抗体确认实验
1)免疫印迹实验
  免疫印迹实验(WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法,就HIV的病原学诊断而言,它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法,WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS-PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1∕100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后,即可使有反应的抗原-抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。WB的敏感性一般不低于初筛实验,但它的特异性很高,这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化,能够检测针对不同抗原成分的抗体,因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。
2)免疫荧光实验
  免疫荧光实验的基本原理为应用H-9或HUT-78培养细胞作为载体,用HIV感染细胞,该细胞内就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上,固定,制备为抗原片,加入待检血清,待检血清中的抗 HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人IgG结合,在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿色荧光。IFA法经济、简便、快速,曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜,需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响,结果不宜长期保存,IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
3)条带免疫试验
 原理同WB,区别仅在于条带膜上的抗原是重组或合成多肽抗原,且是人工固定在条膜上的。一些报告证实其准确性与WB相似。
艾滋病病毒感染有何症状?
  诊断您是否感染了艾滋病病毒唯一可靠的方法就是检测。这是因为许多艾滋病病毒感染者最初几年内没有症状的或与其他疾病非常相似的症状。
  无特殊要求。
  常规静脉采血约2ml,分离血清,4℃保存。严重溶血和乳糜血均会影响结果。应收集在原始密闭的一次性无菌容器中,不能接受从其他检测中分离出的标本。标本存放:室温放置不超过8小时,2-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存,应避免反复冻融。
病毒性感染

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