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| !!二、检测方法\\ |
| !1.形态法 |
| 其主要实验过程是将外周血液或分离的单个核细胞与适量PHA或其他刺激物混合，置37摄氏度培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。PHA可与T细胞膜上的受体结合，使腺苷酸环化酶活化，导致c AMP增多，从而使T细胞发生转化，出现细胞变大，胞质扩大，空泡、核仁明显和核染色质疏松等变化。根据细胞的大小，核与胞质的比例，胞质的染色性及核结构、有无核仁等特征，分别计数原淋巴细胞、过渡型母细胞和未转化的小林巴细胞。\\ |
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| 原淋巴细胞、过渡型母细胞计为转化的淋巴细胞，每份标本计数200个细胞，按下式计算转化率：\\\ |
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| 淋巴细胞转化率=转化的淋巴细胞数/（转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数）*100%\\ |
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| 形态学方法简便易行，便于基层实验室推广采用，但判断结果受主观因素影响较大，有些细胞形态难以确认，因此重复性和可靠性较差。\\ |
| !2. 放射性核素法 |
| 绝大多数外周血中T细胞通常处于细胞周期的G0期，当受刺激物刺激后，T细胞将从G0相进入G1相，并合成蛋白质、RNA和DNA等前体物质，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的DNA前体，即3H-胸腺嘧啶核苷，后者将掺入新合成的DNA中，其掺入的多少可由细胞内的放射强度表示出来，根据掺入的多少可推测细胞的增殖程度。\\ |
| 其主要实验过程是将全血或分离的单个核细胞悬液加入含培养液的试管中或培养板中，实验管加适量PHA，同时设立不加PHA的空白对照，经37摄氏度培养56h后，加适量的3H-胸腺嘧啶核苷，继续培养16h后，经处理弃培养液保留细胞，用液体闪烁器测量，记录每分钟脉冲数（cpm），通常以刺激指数（SI）表示转化能力，一般认为SI值应大于2。\\ |
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| SI=PHA刺激管cpm均值/空白对照管cpm均值。\\ |
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| 3H-胸腺嘧啶核苷掺入法克服了形态法易受主观因素影响的缺点，结果判断客观，但该法所用的液体闪烁仪价格昂贵，并有放射性核素污染的潜在危险，使广泛使用受到限制。\\ |
| !3. MTT比色法 |
| 外周血淋巴细胞与PHA混合培养70h后，加入四甲基偶氮唑盐（MTT）混合后，再培养4-6小时，MTT在活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶作用下，被还原成蓝黑色的MTT-甲，形成MTT-甲的量与细胞增殖程度呈正相关，故通过比色法测OD值，以刺激指数作为判断淋巴细胞转化率的指标。\\ |
| SI的计算公式：SI=试验孔OD均值/对照孔OD均值\\ |
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| 该方法敏感、简单、快速，所需实验条件不高，对环境没有污染，是目前应用较多的观察方法，但实验中应注意掌握MTT的显色反应过程，否则将影响结果的重复性。\\ |
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| 淋巴细胞转化实验是检测细胞免疫功能的经典试验。能刺激淋巴细胞增殖的物质分为两大类，一类为特异性刺激物，一类为特异性刺激物。非特异性刺激物可引起正常人外周血中的淋巴细胞的转化，与机体是否被某种抗原致敏无关；特异性刺激物是指针对已被相应抗原致敏并再次被该刺激物刺激后的淋巴细胞发生的变化。不同的刺激因子可刺激不同类型的淋巴细胞分化增生，从而反映不同淋巴细胞群体发生的变化。\\ |
| 淋巴细胞转化实验是检测细胞免疫功能的经典试验。能刺激淋巴细胞增殖的物质分为两大类，一类为特异性刺激物，一类为特异性刺激物。非特异性刺激物可引起正常人外周血中的淋巴细胞的转化，与机体是否被某种抗原致敏无关；特异性刺激物是指针对已被相应抗原致敏并再次被该刺激物刺激后的淋巴细胞发生的变化。不同的刺激因子可刺激不同类型的淋巴细胞分化增生，从而反映不同淋巴细胞群体发生的变化。\\ |
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| %%tab-方法学评价 |
| __1.形态法__\\ |
| 其主要实验过程是将外周血液或分离的单个核细胞与适量PHA或其他刺激物混合，置37摄氏度培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。PHA可与T细胞膜上的受体结合，使腺苷酸环化酶活化，导致c AMP增多，从而使T细胞发生转化，出现细胞变大，胞质扩大，空泡、核仁明显和核染色质疏松等变化。根据细胞的大小，核与胞质的比例，胞质的染色性及核结构、有无核仁等特征，分别计数原淋巴细胞、过渡型母细胞和未转化的小林巴细胞。\\ |
| 原淋巴细胞、过渡型母细胞计为转化的淋巴细胞，每份标本计数200个细胞，按下式计算转化率：\\\ |
| 淋巴细胞转化率=转化的淋巴细胞数/（转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数）*100%\\ |
| 形态学方法简便易行，便于基层实验室推广采用，但判断结果受主观因素影响较大，有些细胞形态难以确认，因此重复性和可靠性较差。\\ |
| __2. 放射性核素法__ \\ |
| 绝大多数外周血中T细胞通常处于细胞周期的G0期，当受刺激物刺激后，T细胞将从G0相进入G1相，并合成蛋白质、RNA和DNA等前体物质，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的DNA前体，即3H-胸腺嘧啶核苷，后者将掺入新合成的DNA中，其掺入的多少可由细胞内的放射强度表示出来，根据掺入的多少可推测细胞的增殖程度。\\ |
| 其主要实验过程是将全血或分离的单个核细胞悬液加入含培养液的试管中或培养板中，实验管加适量PHA，同时设立不加PHA的空白对照，经37摄氏度培养56h后，加适量的3H-胸腺嘧啶核苷，继续培养16h后，经处理弃培养液保留细胞，用液体闪烁器测量，记录每分钟脉冲数（cpm），通常以刺激指数（SI）表示转化能力，一般认为SI值应大于2。\\ |
| SI=PHA刺激管cpm均值/空白对照管cpm均值。\\ |
| 3H-胸腺嘧啶核苷掺入法克服了形态法易受主观因素影响的缺点，结果判断客观，但该法所用的液体闪烁仪价格昂贵，并有放射性核素污染的潜在危险，使广泛使用受到限制。\\ |
| __3. MTT比色法__ \\ |
| 外周血淋巴细胞与PHA混合培养70h后，加入四甲基偶氮唑盐（MTT）混合后，再培养4-6小时，MTT在活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶作用下，被还原成蓝黑色的MTT-甲，形成MTT-甲的量与细胞增殖程度呈正相关，故通过比色法测OD值，以刺激指数作为判断淋巴细胞转化率的指标。\\ |
| SI的计算公式：SI=试验孔OD均值/对照孔OD均值\\ |
| 该方法敏感、简单、快速，所需实验条件不高，对环境没有污染，是目前应用较多的观察方法，但实验中应注意掌握MTT的显色反应过程，否则将影响结果的重复性。\\ |
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