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稳定的可逆终止法边合成边测序技术
HiSeq 2000技术是基于DNA单分子簇的边合成边测序技术,和专有的可逆终止化学反应原理。测序时将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面(即Flow Cell),这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后,在Flow Cell上形成了数以亿计Cluster,每个Cluster是具有数千份相同模板DNA的单分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸,通过可逆性终止的SBS(边合成边测序)技术对待测的模板DNA进行测序。这种新方法确保了高精确度和真实的一个碱基接一个碱基的测序,为同聚物和重复序列的测序提供了一个很好的解决方案。
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合格的DNA,RNA,且含量大于5微克
DNA:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA主带应在入-Hind III digest最大条带23kb左右,且主带清晰,无弥散;OD值260/280应在1.8~2.0之间:无蛋白质、RNA或肉眼可见杂质污染。
RNA:OD值260/280应在1.8~2.O之间,无肉眼可见污染;使用Agilent Bioanalyzer仪器检测,获得总RNA应28S:18S≥1,RIN≥7.5。
样品浓度:不低于100ng/uL。
DNA样品总量:每次样品制备需要大于3ug的样品。为保证实验质量及延续性,请一次性提供至少6ug的样品。如需多次制备样品,按照制备次数计算样品总量。
RNA样品总量:研究编码蛋白质:动物样品一次制备需10ug的总RNA,植物样品一次制备需15ug的总RNA;研究长链非编码RNA:无论动植物,请一次性提供30ug的高质量总RNA;研究小RNA:请一次性提供至少10ug高质量总RNA。
样品请置于1.5mL管中,做好标记,使用封口膜封好,DNA建议使用干冰或冰袋运输,RNA建议使用干冰运输,请勿反复冻融。
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