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| 中文名称：血清肌酸激酶同工酶电泳分析\\ |
| 英文名称：iso-CK\\ |
| 中文名称：血清肌酸激酶同工酶电泳分析\\ |
| 英文名称：[iso-CK]\\ |
| __项目介绍 ：__\\ |
| CK是由M和B两个亚单位组成的二聚体，在细胞质内共有CK-BB、CK-MM、CK-MB三种同工酶。在细胞线粒体内，还有另一种同工酶称之为CK-Mt。CK-BB主要存在于脑、前列腺等器官，CK-MM主要存在于骨骼和心肌，CK-MB则主要存在于心肌。正常人血液中大部分是CK-MM，少量CK-MB，而CK-BB极少。几种CK同工酶的分子量虽然相同，但免疫特性和电泳迁移率各不相同。在电泳时，CK-BB迁移最快，走在阳极白蛋白区，CK-MB居中，位于α和β球蛋白区，CK-MM较慢，位于阴极γ-球蛋白区，CK-Mt迁移率最低，位于CK-MM之后。电泳后进行酶促反应显色，观察结果。\\ |
| 电泳毕，用酶、辅酶、底物覆盖温育后，在光密度计340nm进行荧光扫描检测，或用底物温育后再覆盖吩嗪二甲酯硫酸盐-氯化硝基四氮唑蓝，使酶区带呈紫蓝色，用可见光扫描检测。 \\ |
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| 1. CK-BB（CK1）：\\ |
| __1. CK-BB（CK1）__\\ |
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| 各种心血管手术15分钟，血中CK-BB也已上升，当天即达峰值（为正常均值的6～10倍），至第3～4天恢复正常。CK-BB的变化是单纯心肌创伤的特异指标。 \\ |
| 有89%的前列腺癌病人血中CK-BB含量升高。其他肿瘤若发生广泛转移时，血中CK-BB亦明显高于无继发癌灶的病例。由于CK-BB主要存在于自内胚层发生的器官，当这些器官发生病变时，血中CK-BB常少升高，故测定血中CK-BB，可能有助于内胚层源性组织肿瘤的诊断。 \\ |
| 2. CK-MB（CK2）：\\ |
| 各种心血管手术15分钟，血中CK-BB也已上升，当天即达峰值（为正常均值的6～10倍），至第3～4天恢复正常。CK-BB的变化是单纯心肌创伤的特异指标。有89%的前列腺癌病人血中CK-BB含量升高。其他肿瘤若发生广泛转移时，血中CK-BB亦明显高于无继发癌灶的病例。由于CK-BB主要存在于自内胚层发生的器官，当这些器官发生病变时，血中CK-BB常少升高，故测定血中CK-BB，可能有助于内胚层源性组织肿瘤的诊断。 \\ |
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| __2. CK-MB（CK2）__\\ |
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| 用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。 \\ |
| 各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。 \\ |
| 进行性肌营养不良病人血清CK-MB亦升高。 \\ |
| 3. CK-MM（CK3）： \\ |
| 用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。进行性肌营养不良病人血清CK-MB亦升高。 \\ |
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| __3. CK-MM（CK3）__\\ |
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| 4. 巨型CK（M-CK）：\\ |
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| __4. 巨型CK（M-CK）__\\ |
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| 健康人血清中各肌酸激酶同工酶占肌酸激酶总活力的百分率为：CK-BB 0%；CK-MB 0%～3%；CK-MM 97%～100%；CK-Mt 0%；CK-MB的阳性决定水平为5%。\\ |
| 健康人血清中各肌酸激酶同工酶占肌酸激酶总活力的百分率为：\\ |
| CK-BB 0%；\\CK-MB 0%～3%；\\CK-MM 97%～100%；\\CK-Mt 0%；\\CK-MB的阳性决定水平为5%。\\ |
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| %%tab-影响因素 |
| 一、项目介绍\\ |
| CK是由M和B两个亚单位组成的二聚体，在细胞质内共有CK-BB、CK-MM、CK-MB三种同工酶。在细胞线粒体内，还有另一种同工酶称之为CK-Mt。CK-BB主要存在于脑、前列腺等器官，CK-MM主要存在于骨骼和心肌，CK-MB则主要存在于心肌。正常人血液中大部分是CK-MM，少量CK-MB，而CK-BB极少。几种CK同工酶的分子量虽然相同，但免疫特性和电泳迁移率各不相同。在电泳时，CK-BB迁移最快，走在阳极白蛋白区，CK-MB居中，位于α和β球蛋白区，CK-MM较慢，位于阴极γ-球蛋白区，CK-Mt迁移率最低，位于CK-MM之后。电泳后进行酶促反应显色，观察结果。\\ |
| 电泳毕，用酶、辅酶、底物覆盖温育后，在光密度计340nm进行荧光扫描检测，或用底物温育后再覆盖吩嗪二甲酯硫酸盐-氯化硝基四氮唑蓝，使酶区带呈紫蓝色，用可见光扫描检测。 \\ |
| 二、方法学评价\\ |
| 1.灵敏度和特异性\\ |
| %%tab-方法学评价 |
| 1.灵敏度和特异性\\ |
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| 2.干扰因素\\ |
| 2.干扰因素\\ |
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| 琼脂糖凝胶电泳法的注意事项：广泛存在于各种组织的腺苷酸激酶(AK)催化ADP产生ATP，干扰同工酶结果的判断。加入AMP可抑制此反应，但过量AMP也抑制CK。NaF抑制AK，不抑制CK，与AMP合用可抑制各种AK同工酶的97％。NaF与CK激活剂Mg2+ 可逐渐形成MgF2 沉淀，所以，NaF与Mg2+ 分开配制，临时混合，不影响各自的作用。电泳需较高pH，酶反应需较低pH，本法中用低离子强度，pH低于8.6的电泳缓冲液；高离子强度，pH低于6.7的基质缓冲液。当含琼脂糖的基质显色剂覆盖于电泳后的凝胶板，上下凝胶中的成分相互扩散后的pH，恰为酶作用的最适pH。Bis-Tris全名为双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷，25℃时pKa＝6.46，是CK同工酶测定优选的缓冲剂。200mmol/L时，CK活力最大。如无Bis-Tris，亦可用咪唑加EDTA作基质缓冲液。EDTA作Ca2+ 的络合剂，因Ca2+ 抑制CK活力。血清CK活力随温度升高而增加，直至45℃，此后更高温度CK活性迅速下降，56℃时很快失活。琼脂糖电泳法测CK同工酶，绝不能像做LDH同工酶电泳那样用温度较高的琼脂糖基质显色液，否则CK活力丧失，而非脱氢酶反应(Nothingdehydogenase，NDH)显著。NDH是相当于白蛋白及β球蛋白区带处的紫红色区带，与蛋白质的巯基有关，标本用量大、pH高时尤其明显，仅四唑盐及PMS就可与标本产生，用测NADPH荧光法可避免。本法中标本用量少，显色时pH较低，NDH反应不明显。CK是巯基酶，绝对需要巯基试剂活化。但巯基试剂可还原四唑盐，N-乙酰半胱氨酸及谷胱甘肽还原四唑盐能力弱，可使背景清晰。PVP是隋性聚合体，作为酶扩散的障碍物加入，可改善区带分离效果。CK不稳定，对光、热及高pH敏感，最好将及时分出的血清充C02 后塞紧管口，置冰室或-30℃保存，至少可稳定半个月，及时测定更好。不主张加巯基活化剂保存。影响CK同工酶电泳与显色的因素很多，必须同时作控制物。\\ |
| 病人准备：\\ |
| 采血前应使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，受检者一般无需禁食。\\ |
| 标本采集和运送要求：\\ |
| 在病人安静状态下静脉采血2~3ml。\\ |
| 静脉采血：除非是卧床病人，一般取坐位采血。体位影响水分在血管内外的分布，干扰测定结果，故在采血前应静坐5min。一般自肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后应立即松开止血带。\\ |
| 采集后注入试管中，防止剧烈震荡，并尽快送往化验室。\\ |
| CK同工酶检测血清和血浆均可。在4℃可保存数天，-15℃可保存2周，若用血浆宜用EGTA，而不用EDTA抗凝。冷冻血浆测定时，应在30℃以下融化，需反复冰融者应加还原剂——巯基乙醇以稳定酶活性，速冻及贮存于-20℃或-70℃，在有β-巯基乙醇和EGTA存在时，MM和MB可稳定数年，而BB则仅稳定半年。由于CK同工酶半衰期短，故酶活性的高低受标本采集时间的影响较大。\\ |
| 琼脂糖凝胶电泳法的注意事项：广泛存在于各种组织的腺苷酸激酶(AK)催化ADP产生ATP，干扰同工酶结果的判断。加入AMP可抑制此反应，但过量AMP也抑制CK。NaF抑制AK，不抑制CK，与AMP合用可抑制各种AK同工酶的97％。NaF与CK激活剂Mg2+ 可逐渐形成MgF2 沉淀，所以，NaF与Mg2+ 分开配制，临时混合，不影响各自的作用。电泳需较高pH，酶反应需较低pH，本法中用低离子强度，pH低于8.6的电泳缓冲液；高离子强度，pH低于6.7的基质缓冲液。当含琼脂糖的基质显色剂覆盖于电泳后的凝胶板，上下凝胶中的成分相互扩散后的pH，恰为酶作用的最适pH。Bis-Tris全名为双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷，25℃时pKa＝6.46，是CK同工酶测定优选的缓冲剂。200mmol/L时，CK活力最大。如无Bis-Tris，亦可用咪唑加EDTA作基质缓冲液。EDTA作Ca2+ 的络合剂，因Ca2+ 抑制CK活力。血清CK活力随温度升高而增加，直至45℃，此后更高温度CK活性迅速下降，56℃时很快失活。琼脂糖电泳法测CK同工酶，绝不能像做LDH同工酶电泳那样用温度较高的琼脂糖基质显色液，否则CK活力丧失，而非脱氢酶反应(NDH)显著。NDH是相当于白蛋白及β球蛋白区带处的紫红色区带，与蛋白质的巯基有关，标本用量大、pH高时尤其明显，仅四唑盐及PMS就可与标本产生，用测NADPH荧光法可避免。\\ |
| 本法中标本用量少，显色时pH较低，NDH反应不明显。CK是巯基酶，绝对需要巯基试剂活化。但巯基试剂可还原四唑盐，N-乙酰半胱氨酸及谷胱甘肽还原四唑盐能力弱，可使背景清晰。PVP是隋性聚合体，作为酶扩散的障碍物加入，可改善区带分离效果。CK不稳定，对光、热及高pH敏感，最好将及时分出的血清充C02 后塞紧管口，置冰室或-30℃保存，至少可稳定半个月，及时测定更好。不主张加巯基活化剂保存。影响CK同工酶电泳与显色的因素很多，必须同时作控制物。\\ |
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| %%tab-病人准备 |
| 采血前应使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，受检者一般无需禁食。\\ |
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| %%tab-标本采集和运送要求 |
| 在病人安静状态下静脉采血2~3ml。\\ |
| 静脉采血：除非是卧床病人，一般取坐位采血。体位影响水分在血管内外的分布，干扰测定结果，故在采血前应静坐5min。一般自肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后应立即松开止血带。\\ |
| 采集后注入试管中，防止剧烈震荡，并尽快送往化验室。CK同工酶检测血清和血浆均可。在4℃可保存数天，-15℃可保存2周，若用血浆宜用EGTA，而不用EDTA抗凝。冷冻血浆测定时，应在30℃以下融化，需反复冰融者应加还原剂——巯基乙醇以稳定酶活性，速冻及贮存于-20℃或-70℃，在有β-巯基乙醇和EGTA存在时，MM和MB可稳定数年，而BB则仅稳定半年。由于CK同工酶半衰期短，故酶活性的高低受标本采集时间的影响较大。\\ |
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| [血心肌酶] |